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新服务“烟草叶片rBiFC”上线烟草叶片rBiFC是指在烟草叶片BiFC原理基础上,通过载体改造,使载体拥有nYFP、cYFP和RFP三个表达框。将nYFP和cYFP2个荧光蛋白的片段分别连接到1组有相互作用的目标蛋白上,侵染烟草叶片,在烟草细胞内共表达这2个融合蛋白和RFP蛋白,通过RFP荧光判定侵染成功与否在此基础之上,待验证蛋白若相互作用,荧光蛋白的2个片段在空间上互相靠近互补,重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子,并在该荧光蛋白的激发光激发下发出黄光,并根据互做结果初步判定蛋白互做位置,在RFP表达框另构建一个已知定位蛋白,激光共聚焦重新观察,若RPF与YFP定位位置重叠,则可获得待验证两个蛋白互做及互做定位结果。 |